质粒转化用多少量?
一、质粒怎么转化?
先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒。质粒干粉(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序);①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒;②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,4
二、感受态细菌转化时需要多大的质粒浓度?
100-500ng/uL。质粒转化不少于10的5次方,连接产物不少于10的6次方。两种质粒是可以同时进入同一个感受态细胞的,比如构建腺病毒载体时。但是要求两种质粒进入同一个感受态细胞,转化效率非常低,一般需要电转或者其他的特殊处理。增加收菌次数,相对提高了质粒的量,这样的话裂解液的量可以适当增加;裂解...
三、酵母质粒转化大肠杆菌需要用多少
酵母质粒转化大肠杆菌需要用1μg的酵母质粒。根据查询相关资料信息显示:转化大肠杆菌的酵母质粒需要用1μg的酵母质粒,不同的实验条件会导致使用量的增加或减少,在做实验前先做合理的细胞膜厚度估计,根据实验要求选择合适的抗性培养基和酵母质粒数量进行转化。
转化时加入的质粒为什么不能超过感受态体积的十分之一
因为转化质粒时,感受态细胞肯定需要过量,一般差不多过量10倍。
为什么质粒体积不能超过细胞的十分之一
提高转化率。用来转化的质粒 DNA 的量不要太多,体积也不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一,这样是保证感受态细胞过量,提高转化率。
实验干货 质粒转化操作手册
取20 μL转化产物涂板,于37摄氏度下过夜培养,次日查看转化结果。剩余菌液与30%甘油按1:1比例混合后,在-80℃下保存。在进行质粒转化时,需注意以下几点:确保质粒DNA的质量和浓度适宜,主要为超螺旋态,并且体积不超过感受态细胞体积的5%,以避免杂菌和杂DNA的污染。整个操作应在无菌条件下进行,使...
重组质粒转化BL21时浓度最低需要多少才能转化进去
一般是根据质粒的种类(严紧型还是松弛型,或者说低拷贝还是高拷贝)和所带抗性决定的,以下是常用抗生素的工作浓度,单位是微克/毫升(ug/ml)氨苄:严紧:20;松弛:60 氯霉素:严紧:25;松弛:170 卡纳:严紧:10;松弛:50 链霉素:严紧:10;松弛:50 正式使用时请参考相应质粒的说明书的推荐浓度...
转化质粒浓度多少合适
100微克到500微克。根据查询武汉三鹰生物技术公司官网资料,质粒浓度足够高以确保实验能够成功,同时也应在可控范围内,避免过高的浓度对细胞产生不利的影响。
大肠杆菌感受态细胞的制备及质粒的转化结果怎么分析?
根据平板中的菌落数可以计算出转化子总数的转化频率,公式如下。转化指总数=菌落数x稀释倍数x转化反应原液总体积/涂板菌液体积 转化的频率(转化子数/每ug质粒DNA)=转化子总数/质粒DNA加入量(ug)转化子总数=Nx1x200/200=N 转化频率=N/10-4(0.1ng=10-4?ug)=Nx104'
用氯化钙法将质粒DNA转入大肠杆菌实验中,转化成功的关键有哪些?
2.质粒dna:数量:质粒dna不超过感受态细胞体积的5 大小:分子量越大转化效率越低,超过30kb的质粒dna很难转化成功 构型:超螺旋的dna具有较高的转化效率,重组dna效率低一些,环状dna相比线性dna转化效率高一些 3.所用试剂纯度、质量、器皿的洁净程度 4.防止杂菌和其他外源dna的污染 ...