做转化的质粒的浓度多少合适？

一、感受态细菌转化时需要多大的质粒浓度？

100-500ng/uL。质粒转化不少于10的5次方，连接产物不少于10的6次方。两种质粒是可以同时进入同一个感受态细胞的，比如构建腺病毒载体时。但是要求两种质粒进入同一个感受态细胞，转化效率非常低，一般需要电转或者其他的特殊处理。增加收菌次数，相对提高了质粒的量，这样的话裂解液的量可以适当增加；裂解要充分，变性和复性按说明应该是不超过5分钟，合理控制时间。

二、转化质粒浓度多少合适

100微克到500微克。根据查询武汉三鹰生物技术公司官网资料，质粒浓度足够高以确保实验能够成功，同时也应在可控范围内，避免过高的浓度对细胞产生不利的影响。

三、大肠杆菌感受态细胞制备时的CaCl2浓度到底是多少

重组DNA分子的构型也影响转化效率，环状重组质粒的转化率较线性重组质粒高10至100倍，因此重组DNA多为环状双螺旋结构。制备感受态细胞所用的CaCl2等试剂需为最高纯度，并用最纯净的水配制，最好分装保存于4℃。此外，细胞的生长状态和密度也至关重要。推荐从-70℃或-20℃甘油保存的菌种直接转接用于制备感...

四、质粒转化大肠杆菌质粒浓度

1、首先制备含有Amp抗生素的LB平板，终浓度为50。2、其次取一个1.5ml离心管，加入100感受态细胞悬液，置冰上加入20ul质粒T+G，用移液器轻柔混匀，静止20分钟。3、最后加入液体培养基使细菌恢复正常，静置12-16个小时即可。

五、质粒浓度过高对电转的影响

影响是因为电转化要比较高的DNA浓度，纯化都会造成大量损失。所以最好在线性化之前把质粒浓度提高到转化所需浓度(大于1ug-ul，略低关系不太大)。

提高质粒DNA的转化效率方法有哪些？

细胞生长密度以刚进入对数生长期时为好，可通过监测培养液的OD600 来控制。DH5α菌株的OD600 为0.5时,细胞密度在5×107 个/ml左右(不同的菌株情况有所不同),这时比较合适。密度过高或不足均会影响转化效率。 2. 质粒的质量和浓度: 用于转化的质粒DNA应主要是超螺旋态DNA(cccDNA)。转化效率与外源...

求助大肠杆菌感受态细胞问题

（1）质粒DNA的质量和浓度： 用于转化的质粒DNA应主要是超螺旋态的，转化率与外源DNA的浓度在一定范围内成正比，但当加入的外源DNA的量过多或体积过大时，则会使转化率下降。一般地，DNA溶液的体积不应超过感受态细胞体积的5%，1ng的cccDNA即可使50ul的感受态细胞达到饱和。对于以质粒为载体的重组分子...

重组质粒转化BL21时浓度最低需要多少才能转化进去

严紧型还是松弛型，或者说低拷贝还是高拷贝）和所带抗性决定的，以下是常用抗生素的工作浓度，单位是微克/毫升（ug/ml）氨苄：严紧：20；松弛：60 氯霉素：严紧：25；松弛：170 卡纳：严紧：10；松弛：50 链霉素：严紧：10；松弛：50 正式使用时请参考相应质粒的说明书的推荐浓度 ...

基因转染时需要多大的质粒浓度？

转染什么？我做细胞时一般是1ug/ml,如果有筛选的话，再低点也可以，比这个高转染效率也没什么变化

重组DNA转化大肠杆菌化学法转化实验影响转化率的关键因素有哪些？

①生长时期：实验发现在对数中期的大肠杆菌易生成感受态。转化时菌浓度应控制在不超过107／ml。②CaCl2法0℃放置时间的影响：细菌经0℃ CaCl2处理后转化率随时间的推移而增加，24h达到最高，之后转化率逐渐下降。③化合物及无机离子的影响：在Ca2+的基础上，联合其他二价金属离子(如Mn2+，CO2+)、DMSO或...