质粒转化后能否用没有添加抗生素的培养基进行培养

1、...在热激以后为什么要先进行培养1小时,这时的培养基中为什么不加入抗生 ...

准确地说，细菌就算软入重组质粒，质粒上的抗性基因也不能马上表达，所以细胞还不具有抗性，细胞比较脆弱，不能在复苏时加抗生素，否则，细菌都死掉了。。。

2、质粒DNA转化大肠杆菌感受态细胞再热激以后进行活化培养,这时培养基为 ...

因为这时候抗抗生素的基因还没有表达出产物，加入抗生素会把细胞杀死。不过青霉素是个例外，因为青霉素只是阻止细菌细胞壁的合成，而不是直接杀死细胞，所以它只是抑制增殖，细胞还可以存活，然后表达抗青霉素基因，然后就能进行正常的增殖了。

3、感受态转化后酶加培养基摇,会不会出问题

热激处理时，应该避免添加酶加培养基，因为热激会导致菌体表面蛋白脱落，形成通道，使质粒得以进入，但这一过程对细菌造成伤害。细菌在42度热激后变得脆弱，部分细菌会死亡并裂解，释放蛋白酶等物质，不利于存活细菌的复苏。因此，使用不加抗生素的LB培养基在37度温浴，有助于细菌更好地复苏。若加入抗生...

摇菌没加抗生素质粒会丢吗

该情况没加抗生素质粒会丢。底盘菌的感受态（已经转了两个质粒进去了），结果用了没加抗生素的培养基摇菌，即便做好了感受态质粒也丢没了。同时转化三种质粒至大肠杆菌，效率极低，个别组合甚至没有。重复两次，结果类似。实验室的BL21转化三种质粒，是同时转三种导致效率太低。第二次转化两种质粒，且添加...

质粒DNA转化大肠杆菌感受态细胞再热激以后进行活化培养,这时培养基为 ...

活化培养用的一般是SOC培养基，这种培养基比LB培养基营养，此时进行的活化培养只是为了让大肠杆菌迅速复苏，恢复分裂活性，此时的细胞还不具抗性，加入抗生素会细胞会死亡。

实验干货 质粒转化操作手册

步骤： 1. 处理连接产物，沉淀DNA，并保存在适当温度下。 2. 将感受态细胞解冻，与纯化的质粒混合，冰上放置10分钟。 3. 将混合物转移至电极杯中，进行电转化。 4. 加入SOC培养基重悬细胞，37摄氏度摇床复苏1小时。 5. 取部分转化产物涂板，过夜培养；剩余菌液与甘油混合后保存。注意事项...

转化之后复苏感受态细胞能用加了氨苄的LB培养基吗

是不应该加的。热激就是让菌体瞬间热胀，表面蛋白掉下来形成通道，质粒才能进去，这个过程对细菌是有伤害的。菌体42度热激之后很脆弱。另外热激时会死一部分细菌，死掉的细菌会裂解，释放出一些蛋白酶什么的，对活着的细菌也不太好。用不加抗生素的LB37度温浴是为了让还活着的细菌更好的复苏。如果加...

无安卞的培养基

但目的基因与质粒A的结合位点位于四环素抗性基因上，因此构建基因表达载体时，目的基因（人的生长激素基因）的插入会破坏四环素抗性基因，但不会破坏氨苄青霉素的抗性基因．所以导入重组质粒的大肠杆菌能在无抗生素的培养基或含义氨苄青霉素的培养基中生长．故选：B．

...此重组质粒导入大肠杆菌,然后将大肠杆菌放在四种培养基中培养...

质粒是基因工程最常用的运载体，质粒A上含有氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因，但目的基因与质粒A的结合位点位于四环素抗性基因上，因此构建基因表达载体时，目的基因（人的生长激素基因）的插入会破坏四环素抗性基因，但不会破坏氨苄青霉素的抗性基因．所以导入重组质粒的大肠杆菌能在无抗生素的培养基或含义...

利用质粒抗生素筛选标记进行转化子筛选的机理

从而杀死生长的细菌。Tet r基因编码特异性蛋白质，这种蛋白质对细菌的膜结构进行修饰，阻止四环素通过细胞膜进入细菌细胞内。抗生素抗性筛选的原理是：不带有抗生素抗性基因的受体菌无法在含有抗生素的培养基（选择培养基）中生长。当带有抗生素抗性基因的载体进入受体菌后，受体菌才能够生长。