酶解叶片获得原生质体的时候,为什么要将叶片剪碎?
1、植物细胞原生质体
酶液量的调整:为了提高游离原生质体的效率,不同的植物材料需要不同的比例和酶液量。例如,去皮叶片需要的酶量较少,而悬浮细胞则需使用较大剂量。渗透压浓度的选择:考虑到不同材料的生理特性差异,寻找最适宜的渗透压浓度至关重要。在实验中,需尝试不同浓度的细胞渗透压,以找到最合适的条件。材料预处理:在进行酶解处理前,通常需要
2、植物原生质体的制备
避光消化:将酶解液放入摇床中,在25-28℃下低速摇晃(40 rpm)3-6小时。期间观察叶片的变化,当叶片变软、边缘透明时说明消化完成。过滤去渣 使用100 μm孔径的滤网过滤酶解后的混合液,去除未消化的组织碎片。收集滤液,其中含有原生质体。离心纯化 第一次离心:将滤液倒入离心管中,以1000转/分钟...
3、原生质体的制备
2、分离原生质体 ① 撕叶下表皮 ② 酶解 将撕去下表皮的叶片剪成小块,放在盛有5mL 酶液的小培养皿中,让去除下表皮的一面接触酶液,辅满一层,在25~28℃下酶解60~90 分钟 3、收集纯化 (1)用吸管将酶解液吸至5mL 离心管中,以600rpm 离心5 分钟以上,使原生质体沉降 (2)将上清(酶解...
4、用于去掉植物细胞壁的纤维素酶和果胶酶的选用.
在植物原生质体的分离过程中,去除细胞壁的步骤至关重要。本世纪前期,机械法常用于此,如将叶肉细胞置于高渗糖溶液中,质壁分离后用剪刀剪碎,可分离出原生质体,但这种方法效率较低。Cocking发明的酶解法则大幅提升了分离效率,成为当前广泛采用的方法。选择合适的酶是酶解法的关键。主要的酶包括纤维素酶...
「原生质体」是一种什么样的物质,如何制备?
以拟南芥为例,可以使用14天龄幼苗的叶片进行酶解。将叶片剪下放入缓冲液中,用小刀切碎后加入酶液,酶解5-6小时。过滤去除植物残渣后,用溶液冲洗,离心收集原生质体。对于水稻,通常使用幼茎作为材料,剪下叶片并去除下表皮,酶解1小时。过滤、冲洗、离心后收集原生质体。游离原生质体的制备过程中,选择...
怎么用解剖刀和镊子,撕去烟草叶片下表皮?求解
这将直接影响到实验的成功率。切记,酶解步骤是关键,酶液的浓度和温度控制都至关重要,稍有偏差都可能导致原生质体分离失败。需要注意的是,酶解后的叶片处理过程需要严格遵守无菌操作规范,以防止污染,影响实验结果。另外,酶解过程中产生的废物需要妥善处理,避免对环境造成污染。
下面是烟草叶片原生质体分离和培养的流程图:请回答:(1)酶解时,在纤维...
(1)在获得植物原生质体时,需在0.5~0.6mol/L的甘露醇溶液环境(较高渗透压)下用纤维素酶和果胶酶混合液处理实验材料,将细胞壁消化除去,获得球形的原生质体.(2)获得原生质体后可用红墨水染色法检测,因为生活状态的原生质体细胞膜具有选择透过性,原生质体不会被染上颜色,但如果原生质体死亡...
怎么用解剖刀和镊子,撕去烟草叶片下表皮?求
沿着叶柄向叶尖的方向轻轻撕取,由于叶片失水,这个过程会相对轻松,下表皮会随之剥离。随后,使用解剖刀小心地切掉叶片上已经没有下表皮的部分,将这部分放入装有5-6毫升酶液的培养皿中,确保在28度的避光环境中进行酶解,这样大约4-5小时后,你就能成功分离出大量具有活性的原生质体。祝你实验顺利!
马铃薯原生质体如何制备、分离纯化?
本人对这几个材料都用过,但我感觉马铃薯、蚕豆和小麦的原生质体还是比较容易制备的,成功与否关键在于材料生长时期的正确选择。最好组织较嫩、具有适度的叶绿体。马铃薯种子在营养土中种植10天左右,用嫩的茎叶就可以做原生质体。或者在MS培养基上种植的幼苗也可以用。多做几次就掌握了,关键是自己的经验...